조단백질 실험 방법

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조단백질 실험 방법
(1) 조단백질
[세미마이크로 킬달법]
1) 장치 및 기구
그림 1과 같은 장치를 쓴다. 전체가 경질유리를 사용하여야 하며, 접속부위는 갈아 맞춘 것으로 하여도 좋다. 장치에 쓰는 고무는 수산화나트륨시액 속에서 10～30분간 끓이고, 다음에 물에서 30～60분간 끓인 다음 물로 충분히 씻어서 쓴다. 다만 동 시험법의 원리를 이용한 기타의 장치 또는 자동‧반자동기기를 사용할 수 있다.

그림 1. 세미마이크로킬달장치

A : 킬달플라스크
B : 수증기 발생기로서 황산 2～3방울을 넣은 물을 넣고 갑자기 끓는 것을 피하기 위하여 비등석을 넣는다.
C : 알칼리용액을 넣는 깔때기
D : 수증기 유도관
E : 내용물이 튀어 올라오는 것을 막는다.
F : 작은 구멍(관의 안지름과 거의 같다.)
G, H : 갈아 맞춘 접속부위
I : 냉각기(바깥지름 200mm, 안지름 350mm, 아래 끝은 약 5mm)
J : 흡수용 플라스크

2) 시약 및 시액 조제
(1) 분해 촉진제 : CuSO4 : K2SO4(1：4)
(2) 부런스위크(Brunswik)시액 : 메틸레드 0.2g 및 메틸렌블루 0.1g을 에탄올 300mL에 녹여서 여과하여 사용하고 갈색병에 보존한다.

3) 시험용액 조제
(1) 통상적으로 질소(N) 함량이 2～3mg에 해당하는 양의 시료를 정밀히 취하여 킬달플라스크에 넣고 여기에 분해 촉진제 약 0.5g을 넣은 후 플라스크 내벽을 따라 황산 3～5mL를 넣은 다음 플라스크를 흔들어 주면서 30% 과산화수소 1mL를 조금씩 조심하여 넣는다. 플라스크를 금망상에서 천천히 가열하고 시료의 탄화물이 보이지 않을 때까지 온도를 높여 끓이고 분해액이 투명한 담청색이 되면 다시 1～2시간 가열을 계속한다. 분해액을 냉각시킨 후 물 20mL를 주의하여 가한 후 이 플라스크를 증류장치에 연결한다.
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