[생물공학] 회분식 미생물의 배양

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[생물공학] 회분식 미생물의 배양
1. 실험 목적
․ 대장균을 액체 배지에서 배양하면서 생장곡선을 확인한다.
․ 대장균의 생장기 중에서 지수 성장기의 비성장 속도를 측정한다.

2. 이론
․ 습열멸균 (sterilization by moist heat)
용액들을 멸균하는데 사용되며 보통 고압증기 멸균기(autoclave)를 사용하여 이루어진다. 고압증기 멸균기는 대상 용액을 밀폐된 상태에서 1kg/㎝2(15lb/in2)의 증기압에서 (120℃)에서 20분 이상(용액의 부피에 따라 결정됨) 처리함으로써 멸균하는 기계이다. 이 방법은 짧은 시간에 1회의 멸균으로 포자까지 사멸시킬 수 있으므로 배양배지 및 여러 용액뿐만 아니라 실험에 사용되는 여러 초자 및 기구 등의 멸균에도 널리 사용되고 있다.

․ 진탕배양 (shaking culture)
호기성균을 보다 활발하게 증식시키기 위하여 액체배지에 통기하는 방법이 이용된다. 실험실 규모에서는 진탕배양법이 흔히 이용된다. 이것은 왕복진탕기(reciprocating shaker, 120～140rpm)나 회전진탕기(rotary shaker, 150～300rpm)위에 배지가 든 면전플라스크를 고정시켜 놓고 항온에서 사카구치(板口)플라스크가 쓰여진다. 또 효모나 세균의 생육 증식곡선의 측정에는 모노관(Monod tube)이 편리하다. 진탕배양 중에는 플라스크가 기울어지지 않게 하여야 하며 진탕 중 솜마개가 배양액에 젖지 않도록 주의하여야 한다.

․ 세포의 생장 곡선
일반적으로 실험실에서 세포를 배양할 때는 회분배양법(batch culture)이 주로 쓰인다. 회분배양이란 일정한 용기 내에 일정량의 배지를 넣고 세포를 접종하여 일정한 시간 동안 배양하는 방법이다. 이때 세포의 생장 상태를 관찰해보면 그림 2-1과 같으며 4가지 단계로 이루어져 있다. 그림 2-1에서 X축은 배양시간을 의미하는데, 동식물세포의 경우 세포분열에 걸리는 시간이 미생물의 경우보다 매우 느리므로 생장곡선의 단계에 대한 시간이 미생물배양의 경우보다 매우 길다.

세포의 생장곡선

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