- 분리한 plasmid DNA를 제한효소로 처리하고, 전기 영동법과 PCR을 이용하여
DNA를 분리하고 확인하는 기술을 습득한다. 제한효소의 종류에 따른 절단 방식을
알아본다.
2. 실험 원리
1) 제한 효소 (Restriction enzyme)
(1) 제한 효소의 정의
* 제한 효소는 DNA 분자의 특정 염기 배열을 인식하여 자르는 일종의 DNA용
가위이다.
- DNA도 특정 부위를 절단할 수가 있는데 DNA를 자른다는 것은 nucleotide들이
연결되어 있는 phosphodiester 결합을 끊어내는 것을 의미한다. 이런 역할을 하는
효소를 nuclease라고 하며 바깥쪽을 자르는가 안쪽을 자르는가에 따라서 각각
exonulease, endonuclease라고 부른다. (대부분의 제한효소는 4쌍 또는 6쌍의
염기배열을 인식하여 자르는데, 제한효소에 의해 잘라지게 되면 양 끝이 상보적인
가닥이 되거나 밋밋한 부분으로 된다. 만일 같은 제한효소로 잘린 DNA가닥을
만나면 상보적인 끝부분 때문에 재결합하기가 쉬운데, 이들을 연결해주는 역할을
하는 것이 리가아제이다.) Endonuclease의 대표적인 것이 바로 제한효소이며,
DNA에 존재하는 특정한 염기서열을 인식하고 인식한 서열부위 또는 그 근처에
존재하는 특정부위를 절단한다. 제한효소는 원래 세균이 자신의 세포 내로 침입해
들어오는 바이러스와 같은 외부 DNA를 제거하기 위한 방어기전으로 가지고 있는
것이며, 자신의 DNA는 절단부위의 염기( adenine, cytosine)를 Methylation 시켜서 자신의 제한효소가 자신의 DNA를 자를 수 없게 보호하고 있다. 제한효소는 여러
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DNA 증폭실험 DNA 증폭실험
1. 실험 목적
생명공학의 기초가 되는 분자 생물학의 기본 기술인 DNA를 다루는 기술을 알아본다.
미생물에서 Plasmid DNA를 분리하고, PCR을 이용하여 DNA를 증폭하고, 제한효소를 이용하여 DNA를 ..
전기 영동 결과 Report DNA를 분리, 정제하여 확인하는 방법으로는 아가로스 젤을 이용하는 전기영동법이 보편적으로 사용된다.
TotalcellDNA 분리 후 염색체 DNA와 플라스미드 DNA를 분리시킨다.
박테리어 파지 DNA의 분리
파지입자로부..
제한효소를 통한 DNA 분해와 전기 영동 [제한효소를 통한 DNA 분해와 전기 영동]
1. 실험 제목
이번 실험에서는 8주차 실험에서 추출해낸 DNA를 제한 효소를 사용하여 여러 개의 DNA 조각으로 분리한 후, 전기영동을 통하여 원하는 DNA 분자가 유입되..
SOUTHE BLOTTING(써던 블로팅) SOUTHERN BLOTTING
1. 원리
써던 블롯팅은 1975년 써던(Southern)에 의하여 고안된 유전자 연구기법이기 때문에 그렇게 명명하였다. 사람의 유전자를 제한요소로 절단하면 여러 크기의 DNA절편이 생긴다. 다양한..
실험보고서 - 해양 미생물 DNA를 이용한 PCR 전기영동 실험 1. Introduction
1)PCR
PCR 이란 DNA의 원하는 부분 (target sequence)을 증폭하는 방법이다.
denaturation, annealing, extension 3가지 과정으로 구성되어 있고
이 과정이(circle) 반복 되면서 DNA가 증폭된다.
..
일반생물학 - DNA 추출 및 PCR PCR 결과 확인(전기영동) DNA 추출 및 PCR PCR 결과 확인(전기영동)
1. 실험 목적(Purpose of experiment)
(1) 쥐의 근육세포에서 DNA를 추출하여 중합효소 연쇄 반응(polymerase chain reaction, PCR) 실험에 이용할 product를 만든다...
[생물학 보고서] DNA Isolation, PCR, 전기영동 실험 -Date
-Title
①DNA Isolation
②PCR(polymerase chain reaction)
③전기영동(electrophoresis)
-Object
①박테리아로부터 DNA를 분리해 낸다.
②특정 DNA 부위를 반복 합성하여 원하는 DNA 분자를 증폭 시킨다.
③전기..
유전공학 실험 - PCR과 Transformation PCR과 Transformation
실험 일시 :
1. Introduction
유전자를 cloning하여 vector에 주입하여 대장균에 주입하여 발현 정도를 관찰한다.
2. Materials
DNA template, primer, DW, DNA polymerase Buffer, dNTPs ..