단백질 분리 및 정제
단백질 분리 및 정제
단백질 분리 및 정제
[[첫째 날]]
(1) Sample Preparation
Principle:
• Extraction Buffer(=lysis buffer) : Tris, TritonX-100, NP-40, SDS 등 여러 가지 detergent들이 cell wall과 mitochondria membrane을 깨트려주고 아래의 표에 제시된 protease inhibitors들이 세포 안의 protease가 단백질을 분해하는 것을 막아준다. 추가적으로 phosphatase inhibitor를 넣어 우리가 확인하려는 pERK의 activation 상태를 유지시킨다.
Procedure:
1. 쥐의 아세포에서 추출한 NIG-3T3 cell을 growing condition(10% Calf serum/ DMEM, 5% CO2, 36.5℃)에서 배양한다.
2. Suction pump로 배지를 제거하고 KRP Buffer를 사용하여 세포를 두 번 washing한다. insulin acute stimulation은 990㎕의 KRP와 10㎕의 insulin을 cell에 처리하여 37℃의 water incubator에 10분간 stimulation을 한다.
3. Suction pump로 KRP를 제거하고 ice cold PBS로 washing한다. 이는 세포의 대사를 멈추고 osmosis가 발생하지 않기 위함이다.
4. Cell extraction buffer 150ml를 세포 위에 뿌려주고 scraper로 긁어주어 화학적인 분해뿐만 아니라 물리적으로도 세포가 분쇄되도록 한다.
5. 이 세포 추출물들을 tube에 담아 centrifuge로 분리하여 상등액에 있는 단백질들을 추출.
(2) Gel 만들기 - 이 과정부터 직접 실습한 내용임.
Purpose : Electrophoresis에 사용할 Acrylamide Gel을 만든다.
Principle:
....
[[첫째 날]]
(1) Sample Preparation
Principle:
• Extraction Buffer(=lysis buffer) : Tris, TritonX-100, NP-40, SDS 등 여러 가지 detergent들이 cell wall과 mitochondria membrane을 깨트려주고 아래의 표에 제시된 protease inhibitors들이 세포 안의 protease가 단백질을 분해하는 것을 막아준다. 추가적으로 phosphatase inhibitor를 넣어 우리가 확인하려는 pERK의 activation 상태를 유지시킨다.
Procedure:
1. 쥐의 아세포에서 추출한 NIG-3T3 cell을 growing condition(10% Calf serum/ DMEM, 5% CO2, 36.5℃)에서 배양한다.
2. Suction pump로 배지를 제거하고 KRP Buffer를 사용하여 세포를 두 번 washing한다. insulin acute stimulation은 990㎕의 KRP와 10㎕의 insulin을 cell에 처리하여 37℃의 water incubator에 10분간 stimulation을 한다.
3. Suction pump로 KRP를 제거하고 ice cold PBS로 washing한다. 이는 세포의 대사를 멈추고 osmosis가 발생하지 않기 위함이다.
4. Cell extraction buffer 150ml를 세포 위에 뿌려주고 scraper로 긁어주어 화학적인 분해뿐만 아니라 물리적으로도 세포가 분쇄되도록 한다.
5. 이 세포 추출물들을 tube에 담아 centrifuge로 분리하여 상등액에 있는 단백질들을 추출.
(2) Gel 만들기 - 이 과정부터 직접 실습한 내용임.
Purpose : Electrophoresis에 사용할 Acrylamide Gel을 만든다.
Principle:
....
-
단백질분리정제
▣ 단백질의 분쇄 및 원심분리 (1) Homogenizer : 시료의 충분한 혼합, 교반, 분쇄에 사용되는데 시료속에서 dispersing shaft가 회 전할 때 dispersing shaft의 끝부분의 rotor구멍으로 시료가 강하게 빨려 들어.. -
[생명과학실험] Tris-HCl Buffer 만들기 - 단백질 분리정제 및 기능분석
Tris-HCl Buffer 만들기 - 단백질 분리정제 및 기능분석 주제 : 단백질 분리정제 및 기능분석 실험일시 : 2008년 3월 11일 2:00p.m.~ 4:30p.m. 목적 : Column chromatography의 준비로서의 buffer만들기 실험목표 .. -
단백질기술
단백질기술 (분석, 정제) 과 목: 생화학실험 교수님: 한인섭 교수님 학 과: 생명공학과 학 번: 19991050 이 름: 정 설 화 단백질 분리 및 정제 1. 크로마토그라피(chromatography) 크로마토그라피란 다공.. -
[화학실험] 단백질 분리정제 및 기능분석 - column chromatography의 준비로서의 buffer 만들기
Report 1. 실험날짜 2. 주제 단백질 분리정제 및 기능분석 - column chromatography의 준비로서의 buffer 만들기 3. 목표 1M의 TRIS-HCl(pH 7.4), NaCl, MgSO Stock solution을 제조한 후 다양한 NaCl농도의 clu.. -
[생명공학실험] ISP Production
1.실험제목 2.실험목적 3.이 론 ISP Production 탈지대두분으로 농축 및 분리대두단백을 제조하는 원리를 알고, 더 나아가 단백질 분리 및 정제과정의 전반적인 개념을 이해한다. 분리대두단백(ISP)은 콩에.. -
단백질 정제
단백질 정제 목 차 1) 단백질정제의 목적 2) 단백질 정제 시 고려사항 3) 단백질의 안정화 4) 단백질의 추출 ① 세포질에 존재하는 가용성 단백질의 추출 ② 세포막에 존재하는 막 단백질의 가용화와 추출 5).. -
[미생물학 실험] 세포로부터의 DNA 분리, 정제
식물과 대장균의 genomic DNA 분리,추출의 차이점 생세포로부터의 DNA 분리, 정제 유전 공학을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다. 1. 제 1 타입은 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유.. -
[생명공학 Plasmid DNA preparation
(1) 실험 제목 : Plasmid DNA preparation (2) 실험 목적 : Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA【pBluescript SKⅡ(+)】를 isolation 한다. (3) 실험 원리 : Plasmid.. -
실험 15주차_플라스미드 DNA 분리 결과 Report
실험 제목 : 플라스미드 DNA 분리 플라스미드 DNA 분리-Harvestingstep 플라스미드 DNA 분리-Resuspens ionstep 플라스미드 DNA 분리-Lys isstep 플라스미드 DNA 분리-Bindingstep 플라스미드 DNA 분리-Washstep .. -
전기영동,마케팅,브랜드,브랜드마케팅,기업,서비스마케팅,글로벌,경영,시장,사례
Agarose gel electrophoresis＆ Gel elution 전기영동 용액에 전류를 통했을 때 용액 중의 하전 입자가 양극 또는 음극으로 이동하는 현상 주로 단백질 관련 물질 또는 유사한 성질을 가진 물질이 대상 이동의 원..
