DNA증폭법
DNA증폭법
1. Inside PCR reaction
PCR의 기본적인 원리를 이해하기 위해서 각각의 step 단위로 살펴보기로 한다. PCR machine은 단순히 온도를 정해진 program에 따라 올렸다 내렸다 하는 장치에 불과하다. 즉 PCR은 온도에 따라 denaturation, annealing, extension의 step이 한 cycle을 이루고 이러한 cycle들이 30회 정도 반복되어 지는 것이다.
2.Components of PCR
(1) Primer set
Primer set은 forward/reverse primer라고도 부르는데 이는 DNA의 방향성과 관련이 있는 용어이다. 일단 primer set은 원하는 target region의 상보적 strand의 각 5부위의 끝에 있는 수십 base pairs 정도의 sequences대로 인위적으로 합성한 oligonucleotides라고 이해하면 된다. 중요한 point는 상보적이라는 것과 3'end에서부터 Taq polymerase가 작용해 새로운 strand를 합성해 나가기 시작한다는 것이다.
(2) dNTPs
dNTPs는 nucleic acids (DNA,RNA)를 구성하는 LEGO block 같은 것으로 이해하면 된다. 중요한 것은 hydrogen bond가 3개인 GC 결합이 2개인 AT 결합보다 안정적이라는 것과 dNTPs는 단순한 building block의 역할을 하는 것뿐만이 아니라 polymerase가 nucleic acids를 합성해 나가는데 필요한 energy를 제공하는 역할도 한다는 것이다.
(3) Taq polymerase
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PCR의 기본적인 원리를 이해하기 위해서 각각의 step 단위로 살펴보기로 한다. PCR machine은 단순히 온도를 정해진 program에 따라 올렸다 내렸다 하는 장치에 불과하다. 즉 PCR은 온도에 따라 denaturation, annealing, extension의 step이 한 cycle을 이루고 이러한 cycle들이 30회 정도 반복되어 지는 것이다.
2.Components of PCR
(1) Primer set
Primer set은 forward/reverse primer라고도 부르는데 이는 DNA의 방향성과 관련이 있는 용어이다. 일단 primer set은 원하는 target region의 상보적 strand의 각 5부위의 끝에 있는 수십 base pairs 정도의 sequences대로 인위적으로 합성한 oligonucleotides라고 이해하면 된다. 중요한 point는 상보적이라는 것과 3'end에서부터 Taq polymerase가 작용해 새로운 strand를 합성해 나가기 시작한다는 것이다.
(2) dNTPs
dNTPs는 nucleic acids (DNA,RNA)를 구성하는 LEGO block 같은 것으로 이해하면 된다. 중요한 것은 hydrogen bond가 3개인 GC 결합이 2개인 AT 결합보다 안정적이라는 것과 dNTPs는 단순한 building block의 역할을 하는 것뿐만이 아니라 polymerase가 nucleic acids를 합성해 나가는데 필요한 energy를 제공하는 역할도 한다는 것이다.
(3) Taq polymerase
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일반생물학 실험 - mini preparation(plasmid DNA를 소량 분리하는 방법)실험
Title : Mini Preparation Objective : DNA의 크기차이에 의해 분리하는 방법인 alkaline lysis method를 이용하여 정제된 DNA의 양을 불린다. Introduction 유전자 재조합은 DNA를 목적에 따라 적절히 자르고 .. -
생물학 - DNA polymerase에 대해의 종류와 생체기능에 대하여
목 차 서론 본론 DNA polymerase의 정의 및 역사 DNA polymerase(Dpase)의 종류 DNA polymerase의 기능 및 역할 DNApolymerase(DNA의복제담당)와 RNApolymerase(DNA의 전사 담당)의 비교 DNA복제 시 DNA p.. -
[생명공학 Plasmid DNA preparation
(1) 실험 제목 : Plasmid DNA preparation (2) 실험 목적 : Ampicillin에 대하여 저항성을 지닌 E. coli (XLI-Blue, Amp-r) 의 plasmid DNA【pBluescript SKⅡ(+)】를 isolation 한다. (3) 실험 원리 : Plasmid.. -
DNA ligase, 전기영동법에 관해
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원핵진핵세포의DNA복제
원핵세포의 DNA 복제와 진핵생물의 DNA 복제 [ 원핵세포의 DNA 복제 ] (1) 불연속 DNA 복제방법 2중 DNA는 항시 정해진 방향으로 진행되면서 두 가닥이 동시에 복제된다. 복제가 시작될 때 복제분지점이 한 방.. -
원핵진핵세포의DNA복제
1. 원핵세포의 DNA 복제 [1] 불연속 DNA 복제방법 2중 DNA는 항시 정해진 방향으로 진행되면서 두 가닥이 동시에 복제된다. 복제가 시작될 때 복제분지점이 한 방향으로의 이동에는 문제점이 있는데 그 이유는 2.. -
DNA polymerase
DNA polymerase DNA의 복제에는 DNA polymerase(Dpase)가 관여한다. 오늘날 세종류(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ)의 Dpase가 알려져 있다. Dpase Ⅰ은 아마 1100개의 아미노산으로 된 1본의 polypeptide로 되었고, 1956년에 Kornberg에 .. -
recombinate DNA 기술
R E P O R T Title: recombinate DNA 기술 교 과 명: 일 반 생 물 학 교 수 명: 신 현 철 교수님 제 출 일: 1995. 9. 26 제 출 자: 생물학과 1학년 9533029 양유미 recombinate DNA에 대.. -
실험 14주차_DNA 모형 제작 결과 Report
실험 제목 : DNA 모형 제작 그림 2.DNA 구조 DNA 모형 제작 왓슨과 크릭이 발견한 DNA의 이중 나선 구조는 오른 방향나선(right-handedhelix)인 B-DNA이다. B-DNA 이외에도 다른 형태의 DNA 구조가 있다. Ⅰ. 기본.. -
[미생물학 실험] 세포로부터의 DNA 분리, 정제
식물과 대장균의 genomic DNA 분리,추출의 차이점 생세포로부터의 DNA 분리, 정제 유전 공학을 위한 DNA분리는 3가지 유형으로 구분할 수 있다. 1. 제 1 타입은 세포 전체 DNA(total cell DNA)이며 클로닝될 유..
