[일반화학] Alkaline Phosphatase[AP]의 정제
[일반화학] Alkaline Phosphatase[AP]의 정제
1. 실험제목
- Alkaline Phosphatase(AP)의 정제
2. 실험목적
- Ion-exchange chromatography에 의한 단백질 정제 원리를 이해하고, DEAE anion exchange column을 이용한 AP 단백질의 정제기법을 습득하게 된다.
3. 실험원리
(1) Alkaline Phosphatase(AP)
- Phosphatase는 인산화 되어 있는 분자에서 인산기를 제거하는 효소이다. 대개 생체내의 효소는 특정한 기질과만 반응하는 기질 특이성을 지니는데, AP같은 경우에는 특정한 기질과만 반응하지 않는 nonspecific phosphatase에 해당한다. 이름에 alkaline이 붙는 이유는 이 효소가 작용할 수 있는 최적의 환경이 염기성이기 때문이다.
AP는 보통 homo-dimer로 작용하며 크기는 140-160 kDa정도이다. (-)charge를 띠며, 75~85도의 온도에서도 activity를 유지한다.
(2) Chromatography
- 크로마토그래피는 이동상과 고정상을 이용하여 혼합물을 분리해내는 방법이다. 고정상(stationary phase)은 고체이고, 이동상(mobile phase)는 액체 또는 기체이다. 혼합물에 있는 각 성분이 두 상과 친화력이 다르면 계를 통과할 때 다른 속도로 움직이며, 그 결과 분리가 일어난다. 이동상과 친화력이 큰 성분은 크로마토그래피를 빨리 통과하지만, 고정상과 친화력이 큰 성분은 느리게 움직인다. 크로마토그래피는 분리 뿐 아니라 물질의 확인 과정에도 매우 유용한데, 어떤 용매가 10cm이동하는 동안 시료 A가 3cm이동하고 B가 5cm이동했다면 같은 용매가 20cm 이동하는 동안 A는 6cm B는 10cm정도 이동할 것이라고 예상할 수 있다. 이러한 비율을 계산해 두면 물질 확인에 유용하게 사용할 수 있는데, Rf=(시료가 이동한 거리) / (용매가 이동한 거리)라는 값을 정의해서 사용한다.
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- Alkaline Phosphatase(AP)의 정제
2. 실험목적
- Ion-exchange chromatography에 의한 단백질 정제 원리를 이해하고, DEAE anion exchange column을 이용한 AP 단백질의 정제기법을 습득하게 된다.
3. 실험원리
(1) Alkaline Phosphatase(AP)
- Phosphatase는 인산화 되어 있는 분자에서 인산기를 제거하는 효소이다. 대개 생체내의 효소는 특정한 기질과만 반응하는 기질 특이성을 지니는데, AP같은 경우에는 특정한 기질과만 반응하지 않는 nonspecific phosphatase에 해당한다. 이름에 alkaline이 붙는 이유는 이 효소가 작용할 수 있는 최적의 환경이 염기성이기 때문이다.
AP는 보통 homo-dimer로 작용하며 크기는 140-160 kDa정도이다. (-)charge를 띠며, 75~85도의 온도에서도 activity를 유지한다.
(2) Chromatography
- 크로마토그래피는 이동상과 고정상을 이용하여 혼합물을 분리해내는 방법이다. 고정상(stationary phase)은 고체이고, 이동상(mobile phase)는 액체 또는 기체이다. 혼합물에 있는 각 성분이 두 상과 친화력이 다르면 계를 통과할 때 다른 속도로 움직이며, 그 결과 분리가 일어난다. 이동상과 친화력이 큰 성분은 크로마토그래피를 빨리 통과하지만, 고정상과 친화력이 큰 성분은 느리게 움직인다. 크로마토그래피는 분리 뿐 아니라 물질의 확인 과정에도 매우 유용한데, 어떤 용매가 10cm이동하는 동안 시료 A가 3cm이동하고 B가 5cm이동했다면 같은 용매가 20cm 이동하는 동안 A는 6cm B는 10cm정도 이동할 것이라고 예상할 수 있다. 이러한 비율을 계산해 두면 물질 확인에 유용하게 사용할 수 있는데, Rf=(시료가 이동한 거리) / (용매가 이동한 거리)라는 값을 정의해서 사용한다.
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