ligation transformation
ligation transformation
Ligation
Transformation
Cloning vector
목적인 DNA를 삽입하여 대장균 등에서 증폭, 유지하기 위한 매개체로, vector DNA는 제한효소로 절단하여 상보적인 절단부위를 갖는 목적으로 하는 DNA 단편을 삽입하여 연결하고 숙주균에 도입할 수 있다
목적 DNA 단편을 연결한 vector DNA는 숙주균이 증식됨에 따라 복제하여 목적 DNA단편을 대대로 유지할 수 있다
Cloning vector의 종류
- Plasmid : pBR322, pUC18
- Phage : lambda phage, M13 phage
- Cosmid : Cos(from lambda phage) + plasmid
- Artificial chromosome(인공 염색체) :
BAC (Bacterial Artificial Chromosome),
YAC (Yeast Artificial Chromosome)
Plasmid vector의 장점
1. 복제기점(origin of replication)을 갖기 때문에 증식할 수 있다
2. 항생제 내성 유전자 (antibiotic resistance gene)
을 가져 selection marker로 사용될 수 있다
3. Multi cloning site(MCS)가
존재하여 원하는 유전자를 끼워 넣을 수 있다
제한효소(Restriction endonucleases)
특성에 따라 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ형 제한효소로
분류한다
DNA의 특정한 염기배열을 식별하고, 이중사슬 구조에서 nucleotide가 연결된 phosphodiester bond (인산-디에스테르 결합)를 절단하는 핵산분해 효소의 하나이다
Ⅰ형 (Type Ⅰ) : 제한효소와 메틸화효소가 뭉쳐져 있고, 인식자리와 제한자리가 서로 다르다. 염기서열은 특이적으로 인식하지만, 인식자리에서 약 1000개 염기 정도 떨어진 곳에서 비특이적으로 DNA를 자른다
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Transformation
Cloning vector
목적인 DNA를 삽입하여 대장균 등에서 증폭, 유지하기 위한 매개체로, vector DNA는 제한효소로 절단하여 상보적인 절단부위를 갖는 목적으로 하는 DNA 단편을 삽입하여 연결하고 숙주균에 도입할 수 있다
목적 DNA 단편을 연결한 vector DNA는 숙주균이 증식됨에 따라 복제하여 목적 DNA단편을 대대로 유지할 수 있다
Cloning vector의 종류
- Plasmid : pBR322, pUC18
- Phage : lambda phage, M13 phage
- Cosmid : Cos(from lambda phage) + plasmid
- Artificial chromosome(인공 염색체) :
BAC (Bacterial Artificial Chromosome),
YAC (Yeast Artificial Chromosome)
Plasmid vector의 장점
1. 복제기점(origin of replication)을 갖기 때문에 증식할 수 있다
2. 항생제 내성 유전자 (antibiotic resistance gene)
을 가져 selection marker로 사용될 수 있다
3. Multi cloning site(MCS)가
존재하여 원하는 유전자를 끼워 넣을 수 있다
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특성에 따라 Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ형 제한효소로
분류한다
DNA의 특정한 염기배열을 식별하고, 이중사슬 구조에서 nucleotide가 연결된 phosphodiester bond (인산-디에스테르 결합)를 절단하는 핵산분해 효소의 하나이다
Ⅰ형 (Type Ⅰ) : 제한효소와 메틸화효소가 뭉쳐져 있고, 인식자리와 제한자리가 서로 다르다. 염기서열은 특이적으로 인식하지만, 인식자리에서 약 1000개 염기 정도 떨어진 곳에서 비특이적으로 DNA를 자른다
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