생물학 및 실험
생물학 및 실험
단백질정량이란
시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정
언제 단백질 정량을 하는가
wild type cell과 mutant cell 사이의 특정 protein양 발현에 차이 여부를 western blot을 이용해서 확인하고 싶을 경우
→ total protein 양을 단백질 정량을 이용해서 맞춰준다.
why
→ total protein양이 동일해야, 특정 protein 양의 상대적인 값을 비교할 수 있기 때문이다.
2) enzyme activity를 측정할 경우(enzyme-catalyzed reaction)
→ enzyme을 substrate에 처리한 후, 단위 시간당 substrate의 농도 감소를 통하여, enzyme activity를 측정한다.
단백질의 구조
단백질 정량 방법
UV spectrophotometry
Biuret method
BCA method
Lowry method
Bradford method
UV spectrophotometry
방향족 아미노산인 phe, tyr, trp에 의한 280 nm
에서 최대 흡광을 이용한 방법.
-50 ug - 1 mg/ml 범위의 단백질양의 측정이 가능
-빠르고 단백질 변성이 없음
- buffer, pH, Salt 등에 영향을 많이 받음
-아미노산 조성에 따라 값이 달라짐.
Biuret method
알칼리 조건하에서 Cu2+ ion이 단백질의 peptide
nitrogen에 결합하여, 보라색의 착화합물을 생성하
고, 540-560 nm에서 흡광을 나타내는 것을 이용한
방법.
-아미노산 조성에 따른 차이 없음
-Sensitivity가 낮음 (1mg/ml)
BCA method
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시료 내에 포함된 단백질의 양, 또는 농도를 구하는 과정
언제 단백질 정량을 하는가
wild type cell과 mutant cell 사이의 특정 protein양 발현에 차이 여부를 western blot을 이용해서 확인하고 싶을 경우
→ total protein 양을 단백질 정량을 이용해서 맞춰준다.
why
→ total protein양이 동일해야, 특정 protein 양의 상대적인 값을 비교할 수 있기 때문이다.
2) enzyme activity를 측정할 경우(enzyme-catalyzed reaction)
→ enzyme을 substrate에 처리한 후, 단위 시간당 substrate의 농도 감소를 통하여, enzyme activity를 측정한다.
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BCA method
Lowry method
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방향족 아미노산인 phe, tyr, trp에 의한 280 nm
에서 최대 흡광을 이용한 방법.
-50 ug - 1 mg/ml 범위의 단백질양의 측정이 가능
-빠르고 단백질 변성이 없음
- buffer, pH, Salt 등에 영향을 많이 받음
-아미노산 조성에 따라 값이 달라짐.
Biuret method
알칼리 조건하에서 Cu2+ ion이 단백질의 peptide
nitrogen에 결합하여, 보라색의 착화합물을 생성하
고, 540-560 nm에서 흡광을 나타내는 것을 이용한
방법.
-아미노산 조성에 따른 차이 없음
-Sensitivity가 낮음 (1mg/ml)
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