HPLC의 기본개념 및 기초원리

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HPLC의 기본개념 및 기초원리
HPLC의 기본개념 및 기초원리

(High Performance Liquid Chromatography)

I. 분리의 개념
1. 머무름(Retention)
크로마토그램에서 각 시료 성분의 피크에 해당되는 부피 또는 시간을 각각 머무른 부피(VR) 및 머무른 시간(tR)이라 하는데 이 값을 용매피크의 머무름(tM)에 대하여 보정한 tR-tM과 VR-VM을 각각 tR 과 VR 으로 표시하고 조정된 머무른 시간 혹은 부피라고 한다. 그런데 시료물질의 머무른 시간이나 머무른 부피의 절대값은 실제로 얻기 어렵다. 왜냐하면 실험조건에 따라 같은 물질의 tR이나 VR값이 달라지기 때문이다. 그래서 미지의 물질을 확인하기 위해서는 기지의 물질이 가지는 tR 과 VR 값과 미지 물질의 tR과 VR의 실험값을 비교함으로써 정성분석이 가능하다.

2. 크기인자(Capacity factor, k )
시료가 분리되려면 정지상에 적당히 머무르게 할 필요가 있는데 이 머무르게 하는 효과를 크기인자라 한다. 이 값은 시료의 조정된 머무른 시간 tR 과 용매피크의 머무른 시간 tM의 비로 구할 수 있다. 이 값은 일정한 정지상에 대하여 이동상의 선택으로 크게 변화시킬 수 있는 인자이다. 또한 혼합물중의 각 성분이 컬럼에서 분리된 상태로 용출되기 위해서는 서로 다른 k 값을 가지고 이동해야한다.

3. 분리인자(Separation factor, )
어떤 실험에서 크기인자가 일치하는 성분이 존재한다면 그 성분들은 분리가 안된다. 이러한 혼합물을 분리할 때 컬럼에서 용출되는 각 성분의 분리상태를 나타내는 인자를 분리인자(separation or selectivity factor)라 하고 로 표시한다. 즉 이 값은 시료중 각 성분의 크기인자(k )값의 비로서 나타낸다. 예를 들어 화합물 A와 B의 k 값이 같아서 =1이라면 두 성분은 전혀 분리되지 않는 것을 의미한다.

4. 컬럼효율과 이론단 해당높이(HETP)
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